آنزیم دی ان آ لیگاز T4

آنزیم دی ان آ لیگاز T4 دنازیست یک آنزیم ضروری و بسیار کارآمد برای هر آزمایشگاه زیست‌شناسی مولکولی است. این آنزیم به طور مؤثر واکنش اتصال کووالانسی رشته‌های اسید نوکلئیک را کاتالیز می‌کند. عملکرد اصلی آن، تشکیل پیوندهای فسفودی‌استر بین گروه‌های فسفات انتهای ‘5 و هیدروکسیل انتهای ‘3 در مولکول‌های DNA دو رشته‌ای، RNA یا هیبریدهای DNA/RNA است. این قابلیت، آنزیم لیگاز T4 را به ابزاری کلیدی برای ترمیم شکستگی‌ها یا شکاف‌های تک‌رشته‌ای (nick) و بازیابی یکپارچگی ساختاری مولکول‌های اسید نوکلئیک تبدیل کرده است.

این محصول برای اتصال قطعات DNA با هر دو نوع انتهای چسبنده (cohesiv/sticky) و صاف (blunt) طراحی شده است که آن را برای انواع روش‌های کلونینگ، جهش‌زایی و سایر تکنیک‌های پیشرفته مولکولی حیاتی می‌سازد.

کاربردهای کلیدی آنزیم T4 DNA Ligase دنازیست

آنزیم T4 DNA Ligase دنازیست در طیف گسترده‌ای از تکنیک‌های زیست‌شناسی مولکولی کاربرد دارد، از جمله:

• کلونینگ: اتصال اینسرت‌های حاصل از برش با آنزیم‌های محدودکننده یا محصولات PCR به انواع وکتورها.
• اتصال قطعات بزرگ: قابلیت اتصال اینسرت‌های DNA با اندازه بزرگ (بیشتر از 1 کیلوباز) به وکتور.
• تشخیص ژن: استفاده در روش‌های تشخیص ژن مبتنی بر لیگاز (Ligase-mediated gene detection).
• آنالیز رونویسی: اتصال DNA با الگوی RNA برای آنالیز رونوشت‌ها (RNA-templated DNA ligation).
• تکنیک AFLP: قابل استفاده در روش «چندشکلی طول قطعات تکثیرشده» (Amplified fragment length polymorphism).

محتویات کیت آنزیم T4 DNA لیگاز دنازیست

این محصول شامل اجزای زیر است:

• آنزیم T4 DNA Ligase: با غلظت 5 U/µL.
• بافر 10X T4 DNA Ligase: بافر اختصاصی واکنش برای فعالیت بهینه آنزیم.
• محلول 50% PEG: برای افزایش کارایی واکنش اتصال قطعات با انتهای صاف (blunt-end ligation).

پروتکل‌های واکنش لیگاسیون

این محصول راهنمای دقیقی برای انواع واکنش‌های لیگاسیون ارائه می‌دهد (بروشور محصول را از تب‌های بالای همین صفحه مشاهده و دانلود کنید):

1. اتصال انتهای چسبنده (Sticky-End Ligation):
   • مقدار آنزیم: 1U در هر واکنش.
   • شرایط واکنش: انکوباسیون به مدت ۳۰ دقیقه تا ۳ ساعت در دمای ۲۲ درجه سانتی‌گراد.
   • نسبت مولی: استفاده از نسبت مولی 1:1 تا 5:1 اینسرت به وکتور.
2. اتصال انتهای صاف (Blunt-End Ligation):
   • مقدار آنزیم: 5U در هر واکنش.
   • افزودنی: نیاز به افزودن محلول 50% PEG برای افزایش کارایی.
   • شرایط واکنش: انکوباسیون به مدت یک شب (overnight) در دمای ۲۲ درجه سانتی‌گراد.
3. اتصال قطعات بزرگ DNA (بیش از ۱ کیلوباز):
   • مقدار آنزیم: 5U در هر واکنش.
   • شرایط واکنش: انکوباسیون به مدت یک شب (overnight) در دمای ۲۲ درجه سانتی‌گراد.

پس از انجام واکنش لیگاسیون، می‌توانید از محصول واکنش برای ترانسفورماسیون سلول‌های مستعد شیمیایی (chemically competent cells) استفاده نمایید.

آنزیم T4 DNA لیگاز دنازیست، آماده ارائه به پژوهشگران گرامی است. جهت خرید آنزیم T4 لیگاز بصورت آنلاین، از همین صفحه اقدام کنید.