آنزیم RT (رونوشت بردار معکوس)، با عملکرد بسیار سریع و فعالیت بهینه در دمای بالا

آنزیم رونوشت بردار معکوس فعال در دمای بالای دنازیست آسیا (Thermostable M-MLV Reverse Transcriptase) برای رونوشت برداری معکوس و تهیه cDNA از انواع مولکول‌های کوتاه و بلند و با ساختارهای ساده و پیچیده RNA طراحی شده است. این آنزیم تنها در ۱۰ دقیقه قادر به رونوشت برداری معکوس از مولکولهای RNA با طول ۱۰ هزار باز و بیشتر و سنتز cDNA می‌باشد. دمای ۵۵ درجه واکنش امکان آن را فراهم می‌سازد تا مولکولهای RNA با ساختار پیچیده و دارای ترکیب غنی از GC نیز بتوانند به راحتی مورد رونوشت برداری قرار بگیرند.

ترانس کریپتاز معکوس مقاوم به حرارت دنازیست، نسخه‌ای مهندسی ژنتیک شده از ترانس کریپتاز معکوس M-MLV است که پایداری حرارتی بالایی دارد. جایگاه‌های جهش جدید در این آنزیم، پایداری حرارتی، نیمه‌عمر، قدرت پیش‌روندگی (پروسسیویتی) و مقاومت آن به مهارکننده‌ها را به طور قابل توجهی افزایش داده‌اند. این محصول همچنین می‌تواند برای رونویسی معکوس مقادیر بسیار کم Total RNA یا mRNA استفاده شود. بافر واکنشِ بهینه‌سازی شده، سازگاری بالایی با آزمایش‌های PCR و qPCR بعدی دارد. cDNA رشتهٔ اولِ تولید شده توسط این آنزیم، به راحتی می‌تواند در واکنش‌های PCR و qPCR بعدی و همچنین برای تولید کتابخانه‌های cDNA تمام‌قد (full-length) مورد استفاده قرار گیرد.

این آنزیم در دو حجم ۲۵ و ۵۰ واکنشی ارائه می‌شود.

موارد استفاده از آنزیم RT:

در بسیاری از آزمایش ها لازم است تا اجزای واکنش تهیه DNA مکمل (cDNA) تغییر داده شده و بهینه شوند. برای مثال، مناسب‌ترین مقدار از مولکول RNA و آنزیم RT استفاده شوند و همچنین نوع پرایمر مورد استفاده نیز برای این واکنش تغییر داده شود تا بهترین نتیجه حاصل گردد؛ یعنی یک یا چند نوع از این پرایمرها برای آزمون و مقایسه استفاده شود:

• پرایمرهای Oligo dT
• پرایمرهای Random Hexamer
• پرایمرهای اختصاصی ژن شما (gene-specific)

در بعضی موارد ممکن است پرایمرهای gene-specific مناسب‌ترین گزینه برای واکنش مورد نظر شما باشند.

در چنین مواردی استفاده از آنزیم RT (این محصول) به استفاده از کیت سنتز cDNA حاوی پرایمرهای رندم هگزامر و کیت سنتز cDNA حاوی پرایمرهای oligo-dT ارجحیت خواهد داشت. اما اگر روش تهیه cDNA شما قبلا ستاپ شده باشد؛ استفاده از کیت‌های مذکور؛ علاوه بر سرعت و دقت بالا، دغدغه شما مبنی بر تهیه سایر اجزای واکنش سنتز cDNA را مرتفع می‌سازد.

نتیجه آزمایشات کنترل کیفی آنزیم RT

آزمایش‌ها و تست‌های کنترل کیفی صورت گرفته توسط بخش تحقیق و توسعه شرکت دنازیست آسیا نشان می‌دهد که انواع مولکول‌های RNA؛ از جمله کد کننده پروتئین، غیر کد کننده بلند (long noncoding RNAs) و مولکول‌های با تعداد کم رونوشت از منابع مختلف سلولی نیز با استفاده از این آنزیم قابلیت تبدیل به cDNA و سپس تکثیر توسط conventional PCR یا quantitative PCR را دارا می‌باشند.

اجزای این محصول:

• آنزیم Thermostable M-MLV Reverse Transcriptase
• بافر واکنش 5x
• محلول 0.1 مولار DTT

محتویات آنزیم RT دنازیست

به کیت آماده ساخت cDNA نیاز دارید؟

• کیت سنتز cDNA با پرایمر oligo-dT
  اجزای کیت: آنزیم RT؛ مخلوط dNTPs؛ پرایمر الیگو؛ آب فاقد ریبونوکلئاز.
• کیت سنتز cDNA با پرایمر رندم هگزامر
  اجزای کیت: آنزیم RT؛ مخلوط dNTPs؛ پرایمر Random Hexamer؛ آب فاقد ریبونوکلئاز.

انواع پرایمر‌های مورد نیاز برای سنتز cDNA

• پرایمرهای رندم اولیگو (Oligo dT-18)
  
• پرایمرهای رندم هگزامر (Random hexamer)