کیت استخراج RNA از بافت حیوانی (روش ستونی)

کیت استخراج RNA از بافت حیوانی دنازیست برای استخراج سریع توتال RNA، از بافت‌ها و سلول‌های حیوانی با استفاده از ستون‌های سیلیکا کاربرد دارد. بعلت استفاده از ستون‌های سیلیکا، امکان جداسازی RNA از مقادیر کم بافت و یا سلول‌های حیوانی توسط کیت استخراج RNA از بافت حیوانی فراهم است. ضمن اینکه سرعت استخراج نسبت به روش‌ بدون ستون استخراج RNA، بطور قابل ملاحظه‌ای بیشتر است.

در کیت استخراج RNA از بافت حیوانی جداسازی فاز (مرحله ۳ فازی در روش استخراج RNA بر پایه فنول) صورت نمی‌گیرد، زیرا مبتنی بر لیز سلولی به واسطه دترجنت و اتصال به ستون‌های سیلیکا است؛ بنابراین برای استفاده توسط افراد کم تجربه مناسب بوده و بالطبع امکان آلودگی فنلی (phenol contamination) وجود ندارد. از کیت استخراج RNA از بافت حیوانی علاوه بر نمونه‌های آزمایشگاهی، برای نمونه‌های بیمارستانی تحقیقاتی نیز مناسب می‌باشد، زیرا مراحل انجام پروسه کوتاه و غیروابسته به سمپلینگ کاربر خواهد بود و تکرار پذیری بالایی دارد.

RNA استخراج شده توسط کیت استخراج RNA از بافت حیوانی دنازیست می‌تواند در کلیه آزمایشات پائین‌دست مورد استفاده قرار گیرد. این کیت با دارا بودن ستون‌ها و محلول‌های منحصر به فرد، RNA را با بیشترین کیفیت، و کمترین میزان آلودگی DNA و پروتئین، از نمونه‌های بیولوژیکی جدا می‌کند. RNA استخراج شده با استفاده از کیت استخراج RNA از بافت حیوانی، برای انواع آزمایشات پائین‌دست از جمله RT-PCR و RT-qPCR مورد آزمایش و تایید بخش فنی دنازیست قرار گرفته است.

کیت استخراج RNA از بافت حیوانی برای استخراج RNA‌هایی با سطح بیان پایین، مانند lincRNAs و antisense lncRNAs نیز مناسب است.

مزایای کیت استخراج RNA از بافت حیوانی (استخراج ستونی)

• استخراج RNA با کیفیت و خلوص بالا از میزان کمی بافت (۲۰ میلی‌گرم): زیرا ماتریس ستون‌های سیلیکا بطور خاص برای اتصال RNA طراحی شده‌اند؛
• سهولت در استخراج RNA: استخراج بر اساس جداسازی فاز نمی‌باشد و به مهارت کمتری نیاز دارد؛
• ایمنی بیشتر حین استخراج RNA و عدم تداخل فنول در واکنش‌های پایین دست: RNA بدست آمده بدون آلودگی فنلی است؛
• افزایش سرعت و کاهش زمان برای هر استخراج به علت استفاده از روش ستونی؛
• کنترل بهتر بر فرآیند: این روش امکان کنترل دقیق‌تر بر شرایط استخراج را فراهم می‌آورد، که منجر به تکرارپذیری بالاتر در آزمایشات می‌شود؛
• مناسب برای افراد کم ‌تجربه: عدم نیاز به جداسازی RNA از فاز آبی و سهولت و سرعت در استفاده به علت ستون‌های سیلیکا.

نکات قابل توجه در انتخاب کیت استخراج RNA از بافت حیوانی
(روش لیز سلولی و اتصال به ستون سیلیکا)

• هزینه: کیت‌‌های مبتنی بر ستون‌های سیلیکا مانند کیت استخراج RNA از بافت حیوانی دنازیست، کمی گران‌تر از مواد مورد نیاز برای روش استخراج RNA با فنول-کلروفرم هستند؛
• محدودیت در پردازش نمونه‌های بزرگ: برای نمونه‌های بسیار بزرگ یا با میزان RNA بالا، ممکن است نیاز به پیش‌تصفیه یا تقسیم نمونه به چندین ستون باشد؛
• حساسیت به شرایط: این روش ممکن است نسبت به شرایط نمونه‌برداری و ذخیره‌سازی حساس‌تر باشد.

مقایسه روش لیز سلولی (این کیت) با روش فنول-کلروفرم (کیت توتال RNA):

روش استخراج RNA مبتنی بر فنول-کلروفرم، با وجود خطرات ایمنی مرتبط با استفاده از فنول و کلروفرم، می‌تواند در برخی موارد مفید باشد:

• مقرون‌به‌صرفه برای نمونه‌های بزرگ و تعداد زیاد: این روش برای پردازش تعداد زیادی نمونه یا نمونه‌های با حجم بزرگ می‌تواند اقتصادی‌تر باشد (بویژه برای تحقیقات دانشجویی)؛
• قابلیت انعطاف‌پذیری: روش فنول-کلروفرم امکان تنظیم دستی شرایط استخراج را فراهم می‌آورد و برای نمونه‌های خاص یا شرایط آزمایشی خاص قابل تطبیق و تنظیم و ترابل شوتینگ بیشتری است؛
• استخراج همزمان RNA و DNA: روش دستی (فنل کلروفرم) می‌تواند برای استخراج همزمان RNA و DNA از یک نمونه مورد استفاده قرار گیرد.

کیت استخراج RNA از بافت حیوانی دنازیست به روش ستونی در سه بسته ۵، ۲۵ و ۵۰ عددی در اختیار پژوهشگران گرامی قرار می‌گیرد.

محلول‌های موجود در کیت استخراج RNA از بافت حیوانی به روش ستونی:

• محلول AR1: باعث شکست دیواره سلولی، ممانعت از فعالیت آنزیم‌های نوکلئاز سلولی و تفکیک اسیدهای نوکلئیک RNA و DNA از یکدیگر و دیگر اجزای سلولی می‌شود. در ضمن در اتصال RNA به ستون کمک می‌کند.
• محلول AR2: باعث شکست دیواره سلولی و اتصال RNA به ستون می‌شود.
• محلول AR3: برای شستشوی ستون حاوی RNA کاربرد دارد. در حین شستشو با این محلول RNA به طور متصل با ستون باقی می‌ماند.
• محلول AR4: برای آزادسازی و بازیابی RNA (یا elution) از ستون استفاده می‌شود.

۴ پارامتر (معیار) کلیدی که باید بعد از استخراج RNA بررسی شوند:

راهنمای عملی سنجش (آنالیز) کیفیت RNA استخراج شده

سایر محلول‌هایی که برای استفاده از کیت استخراج RNA از بافت حیوانی (روش ستونی) دنازیست نیاز دارید

محلول‌های عمومی که برای استفاده از کیت استخراج RNA از بافت حیوانی (روش ستونی) دنازیست نیاز دارید عبارتند از:

• ۲-مرکاپتو اتانول (2Mercaptoethanol a.k.a 2ME)
• اتانول (Ethanol)

DENAzist Animal tissue RNA isolation kit contains spin columns and solutions for quick and easy isolation of total RNA from animal cells and tissues. The unique composition of buffers selectively isolates RNA from biological samples. The isolated total RNA will have the highest quality for any downstream experiment.

S-1023-5 for 5 applications
S-1023 for 25 applications
S-1023-1 for 50 applications